党参和白术对脾虚北京鸭肠道CCK、VIP、SSmRNA表达的影响

采用利血平建立北京鸭脾虚模型,观察健脾益气中药党参和白术对脾虚北京鸭十二指肠和空肠CCK、VIP、SSmRNA表达的影响。结果表明:脾虚组鸭十二指肠和空肠CCK、SSmRNA表达都显著(P<0.05、P<0.01)低于正常组;党参预防组、治疗Ⅱ组以及白术治疗Ⅱ组治疗效果均显著,可使十二指肠和空肠CCK、SSmRNA表达回复到正常水平。说明党参具有预防脾虚的作用,且单独高剂量(中药浓度2g/mL)使用党参和白术能达到治疗脾虚的目的,其作用机理是通过调节胃肠激素在体内的平衡达到治疗脾虚泄泻的目的。     

传染性法氏囊病病毒JS株VP2基因真核表达载体的构建及其应用

应用RT-PCR方法从鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)JS株中扩增出VP2基因,并克隆入T-easy载体。序列测定分析结果表明IBDVJS株的VP2基因与国际标准强毒株的核苷酸序列同源性达98%,氨基酸序列同源性达99%以上。随后将VP2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1/zeo( ),构建成功真核表达质粒pcD-VP2,pcD-VP2体外转染COS-1细胞,能在COS-1细胞中表达。利用pcD-VP2质粒进行动物实验,结果表明雏鸡免疫14d后在体内可检测到特异性抗体,pcD-VP2的真核表达质粒二次免疫诱导鸡产生对IBDV强毒攻击的保护率为67%,这一结果提示VP2基因具有重要开发应用价值。     

徐州地区鸭传染性浆膜炎的病原分离鉴定及药敏试验

从徐州地区临床疑似鸭传染性浆膜炎发病鸭中分离到细菌21株，通过细菌形态、培养特怔、生化试验和动物试验，鉴定为鸭疫里默氏杆菌菌株，对不同地区分离到的21株菌进行了24种常用抗菌药物的药敏试验，结果该24个菌株对头孢类药物、红霉素、链霉素、妥布霉素、新霉素、氯霉素、泰乐菌素、痢特灵等几种药物敏感性较高，对喹诺酮类、强力霉素、丁安卡那霉素、林肯霉素、庆大霉素、氟苯尼考、利福平、复方新诺明等均不同程度地产生了耐药性。不同地区分离到的鸭疫里默氏杆菌对不同抗菌药的敏感程度存在较大差异性，研究结果为该地区鸭传染性浆膜炎的药物防治提供了很好的理论依据.     

猪囊尾蚴囊液抗原制备及ELISA检测条件的优化

本试验采用SephadexG-200层析技术纯化猪囊尾蚴（Cysticercus cellulosae）的囊液粗抗原。共获得两种（CF1、CF2）层析抗原，以酶联免疫吸附试验（ELISA）判定抗原的最适包被浓度以及抗体的最适稀释倍数，各阶段最适反应条件，结果证明CF1具有特异性强、敏感性高、稳定性好、重复性强的特点可以作为免疫诊断囊尾蚴病猪IgG。     

重组牛皮蝇素A蛋白的免疫试验

用由毕赤酵母表达的皮蝇素A（Hypdermin A，HA）蛋白分别免疫新西兰大白兔和牦牛，了解该蛋白免疫效果。用两种不同分子量的重组HA蛋白分别免疫新西兰大白兔1次和2次，ELISA测其抗体消长规律。结果表明，3周后抗体水平达到峰值，后缓慢下降。50KD蛋白免疫效果较30KD蛋白好，差异非常显著（P〈0．01）。用其中50KD的重组HA蛋白分别在7月和9月免疫自然感染牛皮蝇蛆病牦牛，观察感染率和感染强度，ELISA测其抗体消长规律。结果表明，7月免疫组与9月免疫组感染率分别为83．3％和36．3％（对照组为55．5％）；平均感染强度分别为6．5和4．2（对照组为13．0），差异不显著（P〉0．05）。免疫后，抗体水平上升，3个月后缓慢下降。9月免疫组免疫效果较7月免疫组好，三组抗体水平差异非常显著（P〈0．01）。上述研究结果为防治牛皮蝇蛆病疫苗的深入研究和实践运用提供了参考依据。     

犬瘟热病毒Guizhou株血凝素基因的克隆及序列分析

参照已发表的文献合成1对引物，以犬瘟热病毒Guizhou分离株感染Vero细胞收获病毒提取的RNA为模板，RT-PCR扩增获得血凝素蛋白基因（H）901～1661位大小为761bp的片段，并将PCR扩增产物进行克隆和测序。将Guizhou株与GenBank数据库中的31株CDV及国内NanjingOP株的H基因序列进行同源性和系统发生树分析，发现Guizhou株的H基因部分序列与疫苗毒株Convac和Onderstpoort的同源性最低，只有90％；与日本野毒株Tanu96、KDK-1、Hmanatsu、Yanaka、UENO的同源性较高，为96％～98％；且与国内从大熊猫和小熊猫分离的野毒株GP和LP的同源性也较高，为98％和96％。系统发生树分析显示，Guizhou株与国内野毒株GP和LP，及日本的5个野毒株应属同一类，其中和GP株基因型最近，推测这些毒株间有更近的共同祖先。因此怀疑该病毒较适应于野生动物，且在我国某些地区的野生动物中可能存在自然疫源性传播。     

不同氟水平对生长育肥猪毒性的研究

96头始重(24.14±1.12)kg的杜长大三元杂交猪,随机分为4组。第1组为对照组,饲喂基础日粮(含氟量37.39mg/kg),第2、3、4组分别饲喂含氟(以NaF形式添加)量为100、150、200mg/kg的日粮,研究日粮中不同氟水平对猪生长性能和血清某些生化指标的影响,并探讨了氟在肝、肾和肌肉中的沉积,饲料氟和粪氟、血清氟、尿氟之间的相关关系。结果表明,第3、4组猪增重与对照组相比分别降低8.86%(P<0.05)和9.81%(P<0.05),料重比分别升高7.36%(P<0.05)和8.07%(P<0.05)。第4组血清钙、镁、白蛋白含量和碱性磷酸酶的活力与对照组相比分别降低了17.33%(P<0.01)、29.91%(P<0.01)、10.75%(P<0.05)和33.71%(P<0.01)。第3、4组肝、肾和肌肉氟含量与对照组相比显著增加(P<0.05)。各试验组粪氟、血清氟、尿氟含量随饲料中氟含量的增加而升高,且各组间差异极显著(P<0.001),饲料氟与粪氟、血清氟、尿氟含量相关系数分别为0.943(P<0.01)、0.911(P<0.01)和0.959(P<0.01)。     

毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白

建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A（Hypodermotin A，HA）的技术，并对表达条件进行了优化筛选。将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上，构建了重组转移质粒pPIC9k—HA。重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后，用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选。重组酵母细胞在含0．5％甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白，培养3d后收取上清，用阴离子交换层析柱分离纯化。经SDS—PAGE检测，所表达的蛋白相对分子质量约为30000。Western—blotting表明，该蛋白能与兔抗HA血清特异性结合。明胶电泳检测显示，该蛋白具有酶活性。单因素改变表达条件的结果表明，甲醇浓度在0．5％～1％、溶氧量在70％以上、诱导2～3d的情况下表达产量最高，达1500mg／L左右。该研究结果对防治牛皮蝇蛆痛疫苗的深入研究及毕赤酵母在寄生虫领域的应用有一定价值。     

出生前山羊大脑皮质的形成和发育

对山羊胚胎大脑皮质形成及其神经元发育的形态学变化进行了研究，结果表明：（1）山羊胚胎不同类型大脑皮质的皮质板形成时间顺序为旧皮质、新皮质→海马皮质，与种系发生规律相反，提示神经系统内部结构的形成并非完全符合种系进化，而与动物个体组织结构自身的发展相关。不同类型大脑皮质皮质板的分化顺序为古皮质→旧皮质→新皮质，与种系发生的顺序相符。（2）山羊胚胎海马皮质锥体细胞的发育较早，按由深到浅的次序发育，而海马皮质中的非锥体细胞于第19周开始发育。梨状叶皮质锥体细胞发育的较早，最先出现在深层，颗粒层第18周出现。大脑新皮质各层神经元发育顺序依次为：内锥体层→外锥体层、多形层→内颗粒层→外颗粒层。各种类型皮质的神经元在出生前都未发育成熟。     

牛γ-干扰素在昆虫细胞中的高效表达

应用RT-PCR技术从经植物血凝素(PHA)刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞总RNA中扩增出牛-γ干扰素基因(bovine interferon-γ,BovIFN-γ)cDNA,并克隆到pGEM-T easy载体中,经过限制性酶切分析和测序证实,所克隆到的基因编码区序列与已报道的序列完全一致.将含信号肽的BoIFN-γ基因整个编码区cDNA亚克隆到杆状病毒转座载体pFastBac Ⅰ中,构建了转移载体pFastBac 1-BoIFN-γ,转座到宿主菌DH10 Bac中,在含庆大霉素、四环素、卡那霉素、IPTG和X-gal的KGTIX LB平板上筛选白色菌落,提取DNA获得重组穿梭载体Bacmid-BoIFN-γ质粒,与脂质体共转染Sf9细胞,产生有感染力的重组杆状病毒reBac-BoIFN-γ.重组病毒经过传代扩增感染Sf9细胞,通过IFA试验、Western-blot和抗病毒活性测定证实,BoIFN-γ基因在感染的昆虫细胞和上清中得到了表达,上清中活性可达2.651×105U/mL.表达条件优化结果表明,不同MOI对rBoIFN-γ的表达产量影响不大,上清中干扰素活性在感染后5 d达到高峰.